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高速冷凍離心機提取植物蛋白質方法

導讀:一、植物組織蛋白質提取方法 1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。 2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上


返回列表 來源:未知 發布日期:2020-06-17 13:51【
一、植物組織蛋白質提取方法
  
  1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
  
  2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。
  
  3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
  
  4、提取上清液,樣品制備完成。
  
  蛋白質提取液:300ml
  
  1、1Mtris-HCl(PH8)45ml
  
  2、甘油(Glycerol)75ml
  
  3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
  
  這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!
  
二、植物組織蛋白質提取方法
  
  氯醋酸—丙酮沉淀法
  
  1、在液氮中研磨葉片
  
  2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上1小時)棄上清。
  
  3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時),然后真空干燥沉淀,備用。
  
  4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。
  
  5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。
  
  藥品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
  
  這種方法針對雙向電泳,雜質少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!

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