上海安亭科學儀器廠生產的TGL-16aR是一款性價比最好的高速冷凍離心機，最高轉速為1.6萬轉每分鐘，是實驗室和高校和醫院和美容院常用的儀器，文中，介紹TGL-16aR離心機分析口服液人血漿蛋白結合率。
1、 材料
1.1 儀器 :Agilent 1100 高效液相色譜儀，包括脫氣機、四元泵、自動進樣器、柱溫箱、DAD檢測器、Chem Station A.10.02色譜工作站（美國Agilent公司）；CPA225D電子天平（德國Sartorius公司）；TGL-16aR冷凍離心機（上海安亭科學儀器廠）；Milli-Q Advantage A10 超純水機（美國 Millipore公司）；KH5200E型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；CentriVap型離心濃縮儀（美國Labconco公司）。
1.2 試藥 ：透析袋；病毒滅活冰凍人血漿，對照品去甲異波爾定、柚皮苷、新橙皮苷，成都曼思特生物科技有限公司；四磨湯口服液，湖南漢森制藥股份有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。
2 、方法
2.1 、色譜條件 ，色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C 18 柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）；流動相：A為乙腈，B為0.1%甲酸溶液，梯度洗脫（0～5min，15%A；5～10min，25%A；10～15min，30%A）；流速：1mL·min -1 ，檢測波長：283nm，柱溫：35℃，進樣量：10μL。
2.2 、溶液的配制
2.2.1 、空白透析液 。精密稱取K2HPO4 ·3H2O 18.31g，KHPO4 2.70 g，KCl 11.18g置于1 L燒杯中，超純水溶解后，轉移至1 L容量瓶中，用超純水洗滌 3次，且洗滌液轉移至容量瓶，定容后混勻，得pH7.4 磷酸鹽緩沖液（PBS）作為空白透析液 。
2.2.2、標準品溶液 。依次精密稱定去甲異波爾定、柚皮苷、新橙皮苷標準品適量，分別置于 1.0 mL 棕色量瓶中，50%甲醇溶解并定容至刻度，制成相應濃度各標準品儲備液（去甲異波爾定、新橙皮苷、柚皮苷的濃度分別為 0.93、3.52、1.98 mg·mL -1 ），4 ℃避光保存。分別移取相應的標準品儲備液適量，配制成 6個系列濃度的混合標準品溶液（去甲異波爾定、新橙皮苷、柚皮苷的系列濃度分別為 4.50、6.30、8.80、12.30、17.70、24.15 μg·mL -1 ；327.10、457.90、641.10、897.55、1 256.55、1 759.15 μg·mL -1 ；125.25、175.30、245.45、343.60、481.05、673.50 μg·mL -1 ）。
2.2.3 透析外液樣品溶液 分別向20mLPBS中加入800、1000、1200μL四磨湯口服液，混勻，得3個濃度的透析外液樣品溶液。
2.3 、樣品處理
2.3.1 、透析外液樣品 吸取透析外液100μL，置于上海安亭科學科學儀器廠離心機TGL-16aR中設置12000r·min -1離心10min，取上清液10μL進樣分析。
2.3.2 、透析內液樣品處理 精密移取透析內液樣品100 μL，加入甲醇400μL，渦旋3min，混勻，置于上海安亭科學儀器廠離心機TGL-16aR中12000 r·min - 1 離心10min；吸取上清 400 μL，40 ℃N2吹干后，用100μL 50%甲醇復溶，渦旋3min，混勻；12000r·min -1離心10 min，取上清液10μL進樣分析。
2.3.3 、平衡透析實驗 管狀透析袋預處理后，一端用棉線結扎，精密吸取1mL人血漿于袋內，袋內保留少量空氣，另一端棉線系牢，使其懸浮在盛有 20 mL含四磨湯口服液 PBS 溶液的廣口瓶中；調節透析袋內液面高度，使之與外液保持同一水平，避免透析袋貼壁，用封口膜封住瓶口。同法操作9份，置于4 ℃冰箱冷藏平衡。待透析內、外液平衡時，用10 % 高氯酸檢查外液是否有蛋白漏出，漏出者作廢。
3 、結果
3.1 、方法學考察
3.1.1 、專屬性色譜條件下，去甲異波爾定、柚皮苷、新橙皮苷的保留時間分別約為7.97、12.05、12.82min，內源性物質與其他成分對測定無干擾。
3.1.4 提取回收率 精密吸取空白血漿100 μL，配制成低、中、高3種不同質量濃度的質控樣品，按操作后，進樣分析；另取相應的低、中、高3個不同質量濃度對照品混合液各10μL，40℃N2吹干， 50%甲醇100μL復溶，置于TGL-16aR離心機中以12000r·min -1離心10min；取上清液20uL進樣分析，計算提取回收率。
本實驗成功建立了HPLC聯合平衡透析法測定四磨湯口服液中去甲異波爾定等3種藥效成分的血漿蛋白結合率的方法。實驗中，比較了甲醇溶液、乙腈溶液沉淀法與乙酸乙酯萃取法及其使用比例。結果 4 倍量的甲醇沉淀時，各分析物提取回收率較高，內源性成分干擾小。平衡透析法的平衡溫度一般可選在 37 ℃或 4 ℃條件下測定，本實驗結合文獻報道選用4℃恒溫條件下測定。
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