高速冷凍離心機在原料乳測定水楊酸實驗中的應用，文中以上海安亭TGL-16aR高速冷凍離心機為例，文中介紹的方法，本方法具有操作簡單、重現(xiàn)性好、靈敏度高、雜質(zhì)干擾小等特點，可以用于原料乳中水楊酸的檢測。
1 、試驗部分
1.1、儀器：Agilent1260超高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司);超聲波萃取儀(北京五洲東方);多管渦旋振蕩器(北京華威中儀);TGL-16aR冷凍離心機(上海安亭科學儀器廠)。
1.2、試劑與標準品：乙腈(色譜純，美國 Thermo Fisher 公司);甲醇(色譜純，美國 Thermo Fisher 公司);磷酸(優(yōu)級純，默克，質(zhì)量分數(shù) 85%);氨水(優(yōu)級純，國藥，質(zhì)量分數(shù)25.0%～28.0%)． 原料乳樣品:采集于北京市大型乳企生產(chǎn)用原料乳．水楊酸標準品購自中國食品藥品檢定研究院．精確稱取水楊酸標準品10mg置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成1mg/mL的標準儲備溶液，避光、-18℃下保存。用70%乙腈水(體積分數(shù))逐級稀釋混合標準溶液，配制成 0．5、1．0、2．0、5．0、10．0、20．0μg/mL的標準溶液系列。磷酸溶液:稱取11．5 g 磷酸，精確至 0.01g，加入950mL 水，用氨水調(diào)節(jié)pH至2.5，加入水1000mL．流動相A液 ( 磷酸水): 量取磷酸溶液200.0mL，并用水稀釋至1000mL。流動相B液 ( 磷酸甲醇): 量取磷酸溶液250.0mL，并用甲醇稀釋至1000mL 。
2、樣品前處理
稱2g混勻試樣(精確到0.01g)置于10mL刻度離心管中，加入80%乙腈水(體積分數(shù))溶液至5mL刻度線，渦旋30s，超聲提取25min，置于上海安亭科學儀器廠TGL-16aR冷凍離心機中以10000r/min在0℃下離心5min，吸取上層提取液1mL，過 0．22μm 微孔濾膜，供檢測。
3、 色譜條件
色譜柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4．6×100 mm，3．5 μm);柱溫 25 ℃;二極管陣列檢測器(DAD) 300nm;進樣體積10μL;流速 0．8mL/min;流動相:A 為磷酸水、B 為磷酸甲醇，梯度洗脫程序:0～3min，A 由 80%線性降到 10%;3～8 min，A 相保持 100%;8～8．1 min，A 由 10%線性升到 80%;8．1～10 min，A 相保持 80%。
4、結(jié)果與討論
4.1、提取溶劑選擇：分別用甲醇、乙腈、丙酮、氯仿 4 種有機溶劑對原料乳樣品進行提取條件試驗(原料乳中水楊酸添加量為 5mg/kg)，試驗結(jié)果表明:乙腈作為提取溶劑，蛋白沉淀效果最佳，其回收率為93%～105%;丙酮及氯仿雖有一定的提取效果，但回收率較低，均不足 40%;甲醇作為提取試劑，蛋白沉淀效果不佳，個別出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，無法達到良好提取兼凈化效果． 故選擇乙腈作為提取試劑．對于不同濃度的乙腈作為提取試劑對提取效率的影響也做了相應的研究． 選取乙腈質(zhì)量分數(shù)(乙腈 ∶ 水，V ∶ V)分別為 10%、50%、0%、70%、80%、90%、100%的提取試劑，樣品中添加水楊酸的質(zhì)量分為 5mg/kg，進行測試，結(jié)果表明乙腈的質(zhì)量分數(shù)大于 60%時，提取效率無明顯差異。
4.2、樣品凈化方法的選擇：原料乳中含有大量的蛋白質(zhì)和脂肪，凈化的主要目的就是除去脂肪和沉淀蛋白． 由于乙腈具備良好的沉淀蛋白的效果，對目標物進行提取的同時，可將原料乳中的蛋白質(zhì)較為充分的沉淀． 冷凍、最后置于TGL-16aR冷凍離心機中高速離心又能有效的避免脂肪的干擾，故為降低檢測成本，節(jié)約檢測時間，沒有再額外引入其余凈化環(huán)節(jié)。
以上實驗方法僅供大家參考，歡迎大家咨詢購買上海安亭科學儀器廠生產(chǎn)的離心機。
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