在RNA的提取實驗中多由手工操作。 離心機是本次實驗必須要用的設備,還有賽多利斯移液器。文中,上海安亭科學儀器廠就實際操作中的注意事項和大家分享,先分析在實驗過程中需要注意的事項。
上海安亭科學儀器廠在文中介紹實驗過程需要注意事項,文中所用的離心機是上海安亭TDL-20bR高速冷凍離心機:
(1)采取水泡皮、水泡液、血液 (抗凝血)、血清、組織、細胞培養(yǎng)物和口腔分泌物等樣品時,取樣的器材必須經高壓或者干熱滅菌。分離后的樣品在2~8℃條件下保存不能超過24h,-70℃可長期保存,但不能反復凍融3次。
(2)除裂解液4℃保存外,氯仿、異丙醇、75%乙醇在-20℃預冷。試驗需在生物安全柜中進行,每份樣本(1.5ml滅菌離心管)中加入600μl裂解液、200μl待測樣本,再加入200μl氯仿,用手顛倒混勻。置于冷凍離心機中于4℃中12000轉離心15min。在樣品數量較多時,為了避免加樣順序錯誤,可以使移液頭和樣品的位置一對應,還可以使離心管的管蓋略偏向一邊,加完一份樣品之后把管蓋撥向另一邊。
(3)上清液相轉移到對應的離心管時,可把離心管略微傾斜,在移液頭接觸到上清液面后,緩抬持移液器手的拇指,同時將移液器向下深入,當移液頭快接觸到中間層時停止,眼睛盯住移液頭的尖部,如果發(fā)現有白色絮狀物進入,拇指輕壓將其推出,然后停止吸液,這樣可以保證吸取液體中不含DNA和蛋白質,所有樣品轉移完成后切記顛倒混勻。
(4)每一步離心時要注意固定離心管的方向,通常將離心管開口朝向上海安亭離心機轉軸方向放置,這樣產生的核酸會位于離心管底部靠后的一側,方便后面吸干殘液。
(5)在倒去上清倒置于吸水紙時,吸水紙要有一定的厚度,防止液體滲透到試驗臺上,污染其他樣品,也不要在一張紙上放置過多樣品,防止不小心碰倒離心管時,樣品互相污染。用微量加樣器吸干殘液時不要碰倒離心管后部有沉淀的一面,每份樣品更換吸頭。在室溫下干燥時間不宜過長,否則會導致RNA不溶于DEPC水。
(6)實驗過程中產生的吸頭應直接打入盛有10%次氯酸鈉的廢物缸內,并與其他廢棄物品一同交由處理醫(yī)療廢棄物的專業(yè)人員處理 。工作臺及各種實驗用品經常用10%次氯酸鈉 、75%酒精和紫外燈進行消毒。
以上就是總結的一點經驗,以上內容僅供大家參考。